Subculture
1. Culture dish의 media 를 suction 하고 PBS 를 5ml 정도 이용하여 조심스럽게 washing 해준다.
2. PBS 를 suction 한뒤 tripsin 1ml를 dish에 전체적으로 뿌려준다.
3. 인큐베이터에 30초~2분 넣어준다,
(트립신 활성화를 위한 것으로, 세포 종류와 상태마다 상이하며, 건강한 암세포의 경우 2분으로도 충분하지 않을 수 있다.)
4. 1ml media를 culture dish에 넣어준 뒤 피펫팅하여 셀을 떨궈준다.
(이 때 15ml 튜브에 media를 미리 준비해 두면 좋다)
5. 피펫을 이용하여 15ml 튜브에 세포가 담긴 1ml 트립신+1ml media 를 다시 넣어준다.
6. 원심분리 (1500rpm~3000rpm, 3min, 4도) 해준다.
7. 세포를 suction 하지 않게 조심스럽게 media, tripsin 혼합액을 suction 해준다.
8. 새로운 media를 튜브에 넣고 조심스럽게 피펫팅 해준다.
9. 실험에 따라 필요하다면 Cell counting 한 뒤 새로운 Culture dish에 옮겨준다.
10. 라벨링(세포 이름, P number, 날짜, 실험자) 기록 한 뒤 인큐베이터에 넣어준다.