Cell counting

Cell counting

 

 

  1. Culture dish의 media 를 suction 하고 PBS 를 5ml 정도 이용하여 조심스럽게 washing 해준다.

2. PBS 를 suction 한뒤 tripsin 1ml를 dish에 전체적으로 뿌려준다.

3. 인큐베이터에 30초~2분 넣어준다,

(트립신 활성화를 위한 것으로, 세포 종류와 상태마다 상이하며, 건강한 암세포의 경우 2분으로도 충분하지 않을 수 있다.)

4. 1ml media를 culture dish에 넣어준 뒤 피펫팅하여 셀을 떨궈준다.

(이 때 15ml 튜브에 media를 미리 준비해 두면 좋다)

5. 피펫을 이용하여 15ml 튜브에 세포가 담긴 1ml 트립신+1ml media 를 다시 넣어준다.

6. 원심분리 (1500rpm~3000rpm, 3min, 4도) 해준다.

7. 세포를 suction 하지 않게 조심스럽게 media, tripsin 혼합액을 suction 해준다.

8. 새로운 media를 튜브에 넣고 조심스럽게 피펫팅 해준다.

9. Hemocytometer 에 10ul 의 Cell + media 혼합액을 넣어준다.

10. Cell counting 을 해준다.

 

 

 

 

* Cell counting 한 것 계산 하는법

 

1. A, B, C, D 에 있는 cell 수를 센뒤, 4로 나누어준다.

2. 나누어준 수에 1x10^4 을 붙이면 그것이 ml당 세포 수가 된다.

 

ex) 104개의 세포를 ABCD에서 세었다면 104/4x10^4 이 배지가 1ml에 포함하는 세포수가 된다.

즉, 2.6x10^5/ml 이다. 단, 염색액이나 희석액을 사용 할 경우 계산 식이 달라진다.