실험 프로토콜 썸네일형 리스트형 Vitamin A extraction protocol 1) 0.5ml의 sample을 15ml conical tube에 넣어준다. 2) 15ml conical tube에 0.5ml 100% ethanol을 더해준다. 3) 15ml conical tube에 들어있는 혼합물을 vortex 해준다. 4) 15ml conical tube에 2.5ml n-Hexane을 더해준다. 5) 15ml conical tube의 혼합물이 잘 섞이도록 vortex 해준다 (1분) 6) 만들어진 sample 을 3000RPM 에서 5분간 원심분리 해준다. 7) n-Hexane 층에서 1.5ml 만큼 따서 새로운 15ml conical tube에 옮겨준다 (n-Hexane 층은 가장 윗층) 8) flowhood 에서 sample을 nitrogen purge 해준다 (30℃) 9) .. 더보기 DPPH 배경지식 생명체는 호흡을 통해 에너지를 얻고 그 에너지를 이용하면서, 사용한 산소의 2% 정도를 활성산소(Reactive oxygen species, ROS)로 만들게 되는데 이 활성산소는 free radical을 지닌 산소를 의미한다.(lipide peroxide, lipid peroxy radical, peroxynitrite 등) 생체 내에서는 이들에 대한 대비책으로 Catalase, peroxidase, superoxide dismutase(SOD) 같은 항산화효소와 Vitamin E, Vitamin C, Glutathione 같은 항산화물질을 보유하고 있다. 이 활성산소가 문제가 되는 이유는 세포의 지질이나 DNA, RNA를 파괴하고 여러가지 효소가 기능하는 것을 방해하여 질병(암)이나 노화를 촉진한다... 더보기 DPPH protocol DPPH assay 1. 추출물 제조 0.1g 추출물 (가루) 를 10ml 의 100% EtOH 에 섞으면 10000ppm 추출물이 완성된다. 0.01g 추출물에 1ml 100% EtOH 도 가능 ! 2. 이 추출물을 주사기(syringe)와 필터를 이용해 필터 해서 EP tube에 넣어준다 3.추출물을 실험하기 원하는 농도만큼 serial dilution 을 해준다 (ex 50 100 200 400 800 ppm) 10000ppm 이므로 100ppm을 원한다면 100배 희석 4. Positive control 과 negative control 을 준비한다. P.C 의 경우 5mM quercetin N.C 의 경우 100% EtOH 5. 96well plate에 well 당 샘플별로 50 ul 씩 넣어준.. 더보기 Westurn blot protocol (수정중) Westurn blot protocol (수정중) Western blot은 글로만으로는 설명이 어려우므로 곧 사진과 함께 수정할 계획임 1. Western set 준비 (1.5mm glass) 2. 10% gel solution 을 만들고 틀에 부어준다 3. isopropanol을 gel solution 위에 부어준다. 4. gel 이 굳으면 isopropanol을 버려주고 stacking gel solution 을 부어준뒤 1.5mm 에 맞는 콤브를 꼽아준다. 5. 다 굳으면 전기영동 set에 넣고 미리 준비해둔 protein sample(35ul) 을 넣어준다, 마커는 5ul 6. 80v 에서 10분, 100v에서 protein이 전부 내려갈 때 까지 전기영동 해준다 (E-buffer 사용) 7. g.. 더보기 Tm 값 계산 하는 법 Tm 값이란 프라이머와 대상 DNA의 결합이 50% 가 되는 값을 말하는데, 이 Tm 값을 구하는 계산에는 여러 변수가 있지만 가장 간단히 A T G C 를 이용해서 근사 값을 구하는 방법은 아래와 같다. Tm = (4×[G+C]) + (2×[A+T])℃ Tm 값을 너무 낮게 잡으면 증폭이 잘 되지 않아 데이터를 구하기 어렵고 Tm 값을 너무 높게 잡으면 다중 밴드가 나올 수 있기 때문에 적정한 Tm 값을 구하는 것이 관건이다. 보통 PCR 은 45~60 도 이내에서 해결하도록 되어 있고, 두개의 프라이머 (Reverse , Forward) 의 Tm 값이 서로 비슷 할 수록 더 좋은 결과를 내게 된다. (* 또한 두 프라이머의 GC 함량이 50%에 가깝게 하는게 좋다) Tm 온도보다 낮은 1-5도 낮게 .. 더보기 RNA isolation 아래는 같은 실험실의 joseph dela cruz가 쓴 레포트 Joseph dela Cruz Lab Report #4 1. Date: April 28, 2012 2. Title: RNA Isolation 3. Purpose: To understand and be able to isolate RNA for other molecular techniques such as RT-PCR. 4. Principle: The isolation of RNA with high quality is a crucial step required to perform various molecular biology experiment. Trizol Reagent is a ready-to-use reagent used for RNA .. 더보기 Cell counting 아래는 같은 실험실의 Joseph dela Cruz 가 작성한 레포트 Joseph dela Cruz Lab Report #1 1. Date: March 24, 2012 2. Title: Cell Counting 3. Purpose: To quantify the concentration of cells in a suspension. 4. Principle: The most common method for efficient and accurate counting of cells is with the use of haemocytometer. The concentration of a cell suspension can be determined by allowing the cells to fill an optic.. 더보기 겨우살이 (Mistletoe ,Viscum album var) 추출물 추출법 1. Pulverize 'freeze dried 겨우살이' and add 10 times volume(w/v) of PBS after that, 2~3 min homogenize using homogenizer , extract by agitating 8~16 hours on 4°C 2. Collect supernatant by centrifuge ( 8000 x g, 30 min, 4°C) 3. Eliminate impurities by using filter paper (Whatman, No. 2) and get filtrate. 4. Dialysis in same buffer 48h(2days) after that centrifuge (8000 x g, 30 min, 4°C) for eliminat.. 더보기 CCK-8 assay 하는 이유 CCK-8 assay 하는 이유 Cell Proliferation Assay는 세포 실험에서 가장 흔하고, 많이 실험하는 방법 중 하나인데, 이 실험은 주로 특정 약물이나 물질 처리 가 세포에 미치는 영향을 측정할 때 사용 되며, 기타 실험에서도 자주 사용되는 방법입니다. CCK-8 assay는 이 Cell proliferation assay 중 하나이며, CCK-8 이라는 시약이 세포의 dehydrogenase 의해 환원되어 colored product를 생산하게 되는데 이를 이용하여 흡광도 차이로 세포의 proliferation을 측정 할 수 있습니다. 그런데 실험에서 사용한 약물이나 추출물이 환원제 성질이 있으면 이 약물이나 추출물의 농도에 따라 그 자체의 농도에 따라서 colored product.. 더보기 RNA isolation 실험 이름 : RNA isolation Cell line: passage: 처리시간: cell/ml: Bitmap 기타 더보기 이전 1 2 3 다음
