Tm 값 계산 하는 법

Tm 값이란 프라이머와 대상 DNA의 결합이 50% 가 되는 값을 말하는데, 이 Tm 값을 구하는 계산에는 여러 변수가 있지만 가장 간단히 A T G C 를 이용해서 근사 값을 구하는 방법은 아래와 같다.

Tm = (4×[G+C]) + (2×[A+T])℃

Tm 값을 너무 낮게 잡으면 증폭이 잘 되지 않아 데이터를 구하기 어렵고

Tm 값을 너무 높게 잡으면 다중 밴드가 나올 수 있기 때문에 적정한 Tm 값을 구하는 것이 관건이다.

보통 PCR 은 45~60 도 이내에서 해결하도록 되어 있고, 두개의 프라이머 (Reverse , Forward) 의 Tm 값이 서로 비슷 할 수록 더 좋은 결과를 내게 된다.

(* 또한 두 프라이머의 GC 함량이 50%에 가깝게 하는게 좋다)

Tm 온도보다 낮은 1-5도 낮게 잡는 것이 가장 적합

혹은 사이트에서 시퀀스 값만 입력하여 Tm 값을 예측 할 수도 있다.

각 사이트 별 Tm 값 예측기

라츄의 실험노트