실험 프로토콜 썸네일형 리스트형 Protein isolation 실험plan 실험 이름 : Protein isolation Cell line: passage: 처리시간: cell/ml: Bitmap 기타 더보기 Protein assay 실험Plan 실험 이름 : Protein assay Cell line: Bitmap 기타 더보기 NO assay 실험 Plan 실험 이름 : NO assay Cell line: Passage: Bitmap 기타 더보기 CCK-8 실험 Plan 실험 이름 : CCK-8 assay Cell line: Passage: Bitmap 기타 더보기 PCR 기본상식2 PCR 기본상식2 캐리 멀리스(Kary B. Mullis)에 의하여 1985년에 개발된 중합효소 연쇄 반응(polymerase chain reaction, PCR)은 현재 유전물질을 조작하여 실험하는 거의 모든 과정에 사용하고 있는 검사법으로, 검출을 원하는 특정 표적 유전물질을 증폭하는 방법이다. 중합효소 연쇄 반응에 의해, 소량의 유전물질로부터 염기 순서가 동일한 유전물질을 많은 양으로 증폭할 수 있으므로, 인간의 DNA를 증폭하여 여러 종류의 유전질환을 진단하는 데 사용된다. 또한 세균이나 바이러스, 진균의 DNA에 적용하여 감염성 질환의 진단 등에 사용할 수 있다. 중합효소 연쇄 반응의 순서는 3단계로 이루어진다. 열을 이용하여 두 가닥의 DNA를 분리하는 열변성 과정(denaturation)을 .. 더보기 EtBr 과 PCR gel EtBr 과 PCR gel EtBr(Ethidium Bromide)는 자외선(UV)를 받으면 가시광선으로 파장을 변화시키는 형광물질로써, 푸른 빛 계통의 짧은 파장을 파장이 긴 붉은 빛으로 바꾸어 방출시킨다. 또 EtBR은 단일가닥 또는 이중나선 구조를 가진 DNA에 부착되는 성질이 있다. DNA에 붙어 있을 때 형광능력이 향상되서 자외선을 쬐었을 때, 그냥 있었을 때 보다 더 밝게 빛나게 된다. 254nm 정도의 파장인 UV가 DNA에 부딪힐 때 300~370nm 의 파장으로 반사되게 되는데, 이 빛을 EtBr에 흡수 된 다음 590nm의 가시광선으로 바뀌게 된다. EtBr은 전기영동 종료 후 넣기도 하고 전기영동 전 Gel 을 만들 때 미리 넣어주기도 한다. EtBr을 미리 넣는 법과 끝난 뒤 넣는 .. 더보기 RT-PCR 기본상식 RT-PCR 기본상식 생명체는 환경 변화에 적응하고 자신을 유지하기 위한 단백질을 만들기 위해 중심원리(Central dogma) 라는 방식을 이용하게 되는데. 그 방식을 간략하게 살펴보면 생명체의 유전정보를 가지고 있는 DNA를 다음세대로 전달하기 위한 복제(replication) 과정과, DNA가 가지고 있는 정보를 바탕으로 이 정보를 밖으로 전달하기 위해 RNA를 만드는 전사(Transcription), RNA가 가지고 있는 정보를 바탕으로 단백질을 만들어내는(Translation)이 있다. 위와 같이, 정상적인 생명체라면 DNA -> RNA -> 단백질의 순으로 생체분자를 합성하는데. RT-PCR은 RNA -> DNA를 만들어서 만들어진 이 DNA를 증폭시키는 일련의 과정이다. 유전자의 변화를 이.. 더보기 protein assay 기본상식 Protein assay 1. 단백질 정량이란 cell 등에서 protein isolation을 통해서 얻어낸 샘플의 단백질의 양 또는 농도를 구하는 과정으로 western bloting 등을 수행하기 위한 생물,화학적 기초작업이라고 할 수 있다 . 단백질 정량은 기초적인 작업이지만, 가장 중요한 작업(물론 모든 작업 중 하나라도 잘못되면 안되지만..)이라고 할 수 있다. 정량을 잘못하면 항체를 이용한 단백질 발현량 체크 등과 같은 실험을 할 때 잘못된 data를 얻기 때문이다. 특히나 western blot 같은 경우는 시간과 노력이 많이 드는 만큼 단백질 정량과정에서 오류가 생겼다면 ....크흠.. .흡광도를 이용하여 단백질을 정량하는 원리는 Beer-Lambert의 법칙에 따른 것이다. 용액에 의한.. 더보기 Protein assay Protein assay는 얻은 protein을 정량하기 위해 사용하는 실험법으로, Standard로 BSA 를 이용한다. 보통 protein isolation을 통해 얻은 protein solution에 protein이 얼마나 들어있는지 알 수 없으므로 protein assay를 사용하여 숫자로 나타내고 그래프로 정량곡선을 그려서 대략적인 단백질 함량을 얻어 낼 수 있다. 1. 스탠다드 제작을 위한 serial dilution을 준비한다. 예를 들어 각 튜브당 Sample a b c d e f 의 6개의 standard tube가 있다고 할 때 a 튜브에는 80ul BSA b,c,d,e,f 튜브에는 40ul PBS를 넣어준다. 그 뒤 a 튜브에서 40ul 를 취해서 b튜브에 옮.. 더보기 Protein isolation protein isolation은 세포를 lysis 시켜서 세포의 단백질만을 얻어내는 실험법이다. 보통 western blot, SDS page 등을 하기 위해 사용한다. 1. 6well plate 에서 media 를 suction 해준 뒤, PBS로 washing 해주고 다시 suction 해준다. 2. 클린벤치에서 꺼낸 다음 200ul protein lysis buffer 를 각 well 당 처리해 주고 6well plate를 ice 위에 올려준다. 3. 그 다음 cell scraper 를 이용해서 well에 붙어 있는 cell 들을 모아 주고, EP tube에 옮겨준다. (ice 위에 올려둔 상태는 유지) 4. 샘플을 30초간 votex 해주고 10분간 ice 위에 .. 더보기 이전 1 2 3 다음
