Protein assay

 

 

Protein assay는 얻은 protein을 정량하기 위해 사용하는 실험법으로, Standard로 BSA 를 이용한다.

 

보통 protein isolation을 통해 얻은 protein solution에 protein이 얼마나 들어있는지 알 수 없으므로 protein assay를 사용하여

 

숫자로 나타내고 그래프로 정량곡선을 그려서 대략적인 단백질 함량을 얻어 낼 수 있다.

 

 

 

 1. 스탠다드 제작을 위한 serial dilution을 준비한다. 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

예를 들어 각 튜브당 Sample a b c d e f 의 6개의 standard tube가 있다고 할 때

 

 

 

a 튜브에는 80ul BSA

b,c,d,e,f 튜브에는 40ul PBS를 넣어준다.

그 뒤 a 튜브에서 40ul 를 취해서 b튜브에 옮겨준 뒤 피펫팅 한다.

그 뒤 b 튜브에서 40ul 를 취해서 c 튜브에 옮겨준 뒤 피펫팅 한다.

그 뒤 c 튜브에서 40ul 를 취해서 d 튜브에 옮겨준 뒤 피펫팅 한다.

그 뒤 d 튜브에서 40ul 를 취해서 e 튜브에 옮겨준 뒤 피펫팅 한다.

f 튜브에는 40ul 의 PBS만 넣어준다.

 

(40ul 하는 이유는 96well plate에서 3반복 하기위해서는 최소 30ul가 필요하다, 필요에 따라 용량을 늘리거나 줄일 수 있다.)

 

 

2. PAB(protein assay buffer) 1:3 으로 TW를 혼합하여 희석해 준다. (ex, 1.4ml PAB + 4.2ml TW)

 

솔루션을 만든 뒤에는 호일로 감싸서 빛을 차단해 주는 것이 좋다.

 

3. 96well plate를 준비하고 준비해놓은 standard와 protein 샘플을 10ul씩 각 well에 처리해준다.

 

4. 그 뒤 각 well 당 200ul의 희석된 PAB 용액을 처리 해준다.

 

5. 뚜껑을 닫고 호일로 감싸고 2분 동안 room temperature에 둔다

 

6. ELASA reader 를 이용하여 595nm 하에서 감광한다.