실험 프로토콜 썸네일형 리스트형 cDNA 만들기 *이전의 프로토콜은 RNA isolation 항목 참조 1. Nano drop 기계를 이용하여 분리해낸 RNA의 순도 및 함량을 측정한다. (아래 표는 나노드랍 시행 시 예시) A Abs Value Abs Value 260 2.645 OD 2116 ng/µl 260 2.5560001 OD 2044.8 ng/µl 280 1.4524 OD 1.82 ratio 280 1.4047 OD 1.82 ratio B Abs Value Abs Value 260 2.4766 OD 1981.28 ng/µl 260 OD ng/µl 280 1.3828 OD 1.79 ratio 280 OD ratio C Abs Value Abs Value 260 3.3081 OD 2646.48 ng/µl 260 OD ng/µl 280 3.395.. 더보기 Treatment 추출물이나 시약을 배지에 첨가하여 그 효능을 알아 보거나 원하는 결과를 이끌어 낼 때 자주 사용하는 방법. 보통 50 100 200 400 800ppm 까지 사용하며, 대부분의 물질이 800ppm 정도에서는 독성을 나타내므로 그 이상은 의미가 없다고 볼 수 있다. PPM(Part per million)이란 100만분율로, 어떤 물질 내에서 특정한 물질이 얼마나 들어가 있는지를 나타낼 때 사용한다. 예를 들어 식염수 1000g 중 식염을 10g 함유한 경우는 10/1000000 x 1000000 = 10ppm 이 된다. 만약 x 라는 추출물을 배지에 10000ppm 첨가하여 만들고 싶다면 배지 10ml 에 0.01g 추출물을 첨가하면 된다. 이 경우는 10ml = 0.01L 이고 0.01.. 더보기 RNA isolation RNA isolation 프로토콜 75% Ethanol 50mL , 얼음 , Chloroform , isopropane , PBS , EPtube (effendorf tube) , Cell scraper , Trizol (Cat NO . 15506 - 91) 1. 클린벤치에서 6well에서 media를 석션하고 well 당 PBS 2mL를 사용해서 washing한다. 2. PBS 석션하고 얼음에 넣는다. 3. Trizol 500 ㎕ 씩 각 well에 넣어준다. ( 세포벽 분해 ) 4. Cell scraper 이용해서 cell 모으고 EPtube에 넣어준다. 5. 각 튜브 당 Chloroform 200 ㎕ 씩 넣어준다. 6. 30초간 Votexing, 5분간 얼음에 보관. 7. 원심분리 15000 RPM .. 더보기 CCK-8 assay CCK - 8 프로토콜 -1 이전은 Cellcounting 항목 참조 1. 96well에 well당 1x10^5 cell/ml 만큼 seeding 한다. (seeding 하는 세포 수는 세포 종류에 따라 상이 할 수 있음) 2. Raw 264.7 Cell의 경우 1시간 후 LPS를 10ppm 만큼 처리해준다. (tip.100uL 이므로 11uL의 100ppm LPS를 넣어주면 10ppm이 된다) 3. 다시 1시간 뒤 추출물을 12uL 만큼 treatment 한다. (tip. 1000ppm짜리를 만든 뒤 12uL 만큼 넣어주면 100ppm이 된다) 4. 실험에 따라 12h, 24h, 48h 등등 시간 뒤에 media를 석션한다. 5. 100uL media를 넣어준 뒤 10uL CCK-8 용액 처리를 한다 .. 더보기 NO assay NO assay Protocol 이전의 항목은 Cell counting 항목 참조. 1. 96well plate에 well당 4x10^5 cell/mL 만큼 Seeding 해준다. 2. Raw 264.7 cell의 경우 1시간 뒤 LPS 10ppm을 처리해준다. 3. 다시 1시간 뒤 treatment를 처리를 해준다.(Raw 264.7 cell이 아닐 경우 seeding 후 2시간 뒤) 4. 실험에 따라 12h, 24h, 48h 후 well당 50uL를 옆이나 다른 96well plate에 옮긴다. 5. 그 후 빛이 없는 환경(암실)에서 각 Well당 50uL의 Grease를 첨가해준다. 6. 그 후 호일로 96well plate를 감싸 준 뒤 10분 후 540nm에서 read 해준다. . 더보기 Subculture Subculture 1. Culture dish의 media 를 suction 하고 PBS 를 5ml 정도 이용하여 조심스럽게 washing 해준다. 2. PBS 를 suction 한뒤 tripsin 1ml를 dish에 전체적으로 뿌려준다. 3. 인큐베이터에 30초~2분 넣어준다, (트립신 활성화를 위한 것으로, 세포 종류와 상태마다 상이하며, 건강한 암세포의 경우 2분으로도 충분하지 않을 수 있다.) 4. 1ml media를 culture dish에 넣어준 뒤 피펫팅하여 셀을 떨궈준다. (이 때 15ml 튜브에 media를 미리 준비해 두면 좋다) 5. 피펫을 이용하여 15ml 튜브에 세포가 담긴 1ml 트립신+1ml media 를 다시 넣어준다. 6. 원심분리 (1500rpm~3000rpm, 3min.. 더보기 Cell counting Cell counting 1. Culture dish의 media 를 suction 하고 PBS 를 5ml 정도 이용하여 조심스럽게 washing 해준다. 2. PBS 를 suction 한뒤 tripsin 1ml를 dish에 전체적으로 뿌려준다. 3. 인큐베이터에 30초~2분 넣어준다, (트립신 활성화를 위한 것으로, 세포 종류와 상태마다 상이하며, 건강한 암세포의 경우 2분으로도 충분하지 않을 수 있다.) 4. 1ml media를 culture dish에 넣어준 뒤 피펫팅하여 셀을 떨궈준다. (이 때 15ml 튜브에 media를 미리 준비해 두면 좋다) 5. 피펫을 이용하여 15ml 튜브에 세포가 담긴 1ml 트립신+1ml media 를 다시 넣어준다. 6. 원심분리 (1500rpm~3000rpm, 3.. 더보기 이전 1 2 3 다음