DPPH assay
1. 추출물 제조
0.1g 추출물 (가루) 를 10ml 의 100% EtOH 에 섞으면 10000ppm 추출물이 완성된다.
0.01g 추출물에 1ml 100% EtOH 도 가능 !
2. 이 추출물을 주사기(syringe)와 필터를 이용해 필터 해서 EP tube에 넣어준다
3.추출물을 실험하기 원하는 농도만큼 serial dilution 을 해준다 (ex 50 100 200 400 800 ppm)
10000ppm 이므로 100ppm을 원한다면 100배 희석
4. Positive control 과 negative control 을 준비한다.
P.C 의 경우 5mM quercetin N.C 의 경우 100% EtOH
5. 96well plate에 well 당 샘플별로 50 ul 씩 넣어준다
(ppm)
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P.C |
N.C |
50 |
100 |
200 |
400 |
800 |
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50ul |
50ul |
50ul |
50ul |
50ul |
50ul |
50ul |
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50ul |
50ul |
50ul |
50ul |
50ul |
50ul |
50ul |
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50ul |
50ul |
50ul |
50ul |
50ul |
50ul |
50ul |
6. 150ul의 DPPH 용액을 well 마다 넣어준다 (추출물 50 + DPPH 150 = 총 200)
7. 30분간 RT (Room Temperature) 에서 incubating 해준다
8. 520 nm 파장에서 감광해서 분석한다. (ELISA 이용)
