RAW 264.7 cell line RAW 264.7 cell line은 수컷 mouse 유래 세포로, immune modulation 실험을 할 때 많이 사용 되는 세포이다. 실험에 따라 LPS(lipopolysaccharide)를 사용하여 active 시킨 뒤, 사용 한다. 추출물을 처리 하는 실험에서는 이미 활성화 된 RAW 264.7 cell의 NO 생성을 얼마나 억제 할 수 있는가, 세포 증식억제, 활성 유무 등을 확인한다. (CCK-8 assay와 NO assay를 활용한다) 배양시에는 DMEM 10% FBS 1% P/S 을 사용한다. 세포 증식이 빠른 편이므로 배지 관리에 주의하는게 좋다. 자세한 Cell line 정보는 아래 내용 참조. Items Contents KCLB No. 40071 Name RAW 264.7 Dist.. 더보기 RNA isolation RNA isolation 프로토콜 75% Ethanol 50mL , 얼음 , Chloroform , isopropane , PBS , EPtube (effendorf tube) , Cell scraper , Trizol (Cat NO . 15506 - 91) 1. 클린벤치에서 6well에서 media를 석션하고 well 당 PBS 2mL를 사용해서 washing한다. 2. PBS 석션하고 얼음에 넣는다. 3. Trizol 500 ㎕ 씩 각 well에 넣어준다. ( 세포벽 분해 ) 4. Cell scraper 이용해서 cell 모으고 EPtube에 넣어준다. 5. 각 튜브 당 Chloroform 200 ㎕ 씩 넣어준다. 6. 30초간 Votexing, 5분간 얼음에 보관. 7. 원심분리 15000 RPM .. 더보기 CCK-8 assay CCK - 8 프로토콜 -1 이전은 Cellcounting 항목 참조 1. 96well에 well당 1x10^5 cell/ml 만큼 seeding 한다. (seeding 하는 세포 수는 세포 종류에 따라 상이 할 수 있음) 2. Raw 264.7 Cell의 경우 1시간 후 LPS를 10ppm 만큼 처리해준다. (tip.100uL 이므로 11uL의 100ppm LPS를 넣어주면 10ppm이 된다) 3. 다시 1시간 뒤 추출물을 12uL 만큼 treatment 한다. (tip. 1000ppm짜리를 만든 뒤 12uL 만큼 넣어주면 100ppm이 된다) 4. 실험에 따라 12h, 24h, 48h 등등 시간 뒤에 media를 석션한다. 5. 100uL media를 넣어준 뒤 10uL CCK-8 용액 처리를 한다 .. 더보기 이전 1 ··· 29 30 31 32 33 다음