NO assay NO assay Protocol 이전의 항목은 Cell counting 항목 참조. 1. 96well plate에 well당 4x10^5 cell/mL 만큼 Seeding 해준다. 2. Raw 264.7 cell의 경우 1시간 뒤 LPS 10ppm을 처리해준다. 3. 다시 1시간 뒤 treatment를 처리를 해준다.(Raw 264.7 cell이 아닐 경우 seeding 후 2시간 뒤) 4. 실험에 따라 12h, 24h, 48h 후 well당 50uL를 옆이나 다른 96well plate에 옮긴다. 5. 그 후 빛이 없는 환경(암실)에서 각 Well당 50uL의 Grease를 첨가해준다. 6. 그 후 호일로 96well plate를 감싸 준 뒤 10분 후 540nm에서 read 해준다. . 더보기 Subculture Subculture 1. Culture dish의 media 를 suction 하고 PBS 를 5ml 정도 이용하여 조심스럽게 washing 해준다. 2. PBS 를 suction 한뒤 tripsin 1ml를 dish에 전체적으로 뿌려준다. 3. 인큐베이터에 30초~2분 넣어준다, (트립신 활성화를 위한 것으로, 세포 종류와 상태마다 상이하며, 건강한 암세포의 경우 2분으로도 충분하지 않을 수 있다.) 4. 1ml media를 culture dish에 넣어준 뒤 피펫팅하여 셀을 떨궈준다. (이 때 15ml 튜브에 media를 미리 준비해 두면 좋다) 5. 피펫을 이용하여 15ml 튜브에 세포가 담긴 1ml 트립신+1ml media 를 다시 넣어준다. 6. 원심분리 (1500rpm~3000rpm, 3min.. 더보기 Cell counting Cell counting 1. Culture dish의 media 를 suction 하고 PBS 를 5ml 정도 이용하여 조심스럽게 washing 해준다. 2. PBS 를 suction 한뒤 tripsin 1ml를 dish에 전체적으로 뿌려준다. 3. 인큐베이터에 30초~2분 넣어준다, (트립신 활성화를 위한 것으로, 세포 종류와 상태마다 상이하며, 건강한 암세포의 경우 2분으로도 충분하지 않을 수 있다.) 4. 1ml media를 culture dish에 넣어준 뒤 피펫팅하여 셀을 떨궈준다. (이 때 15ml 튜브에 media를 미리 준비해 두면 좋다) 5. 피펫을 이용하여 15ml 튜브에 세포가 담긴 1ml 트립신+1ml media 를 다시 넣어준다. 6. 원심분리 (1500rpm~3000rpm, 3.. 더보기 이전 1 ··· 30 31 32 33 다음